Bst 2.0 DNA Polymerase (glisewol san)
Bst DNA polymerase V2 sòti nan Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, ki gen 5′→3′ ADN polymerase aktivite ak gwo aktivite ranplasman chèn, men pa gen aktivite 5′→3′ exonuclease.Bst DNA Polymerase V2 se depreferans apwopriye pou strand-deplasman, izotèmik anplifikasyon LAMP (Loop medyatè izotèmik anplifikasyon) ak sekans rapid.
Eleman
| Eleman | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (san glisewol) (8U/μL) | 0.2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 tanpon | 1.5 ml | 2 × 1.5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 ml | 2 × 1.5 mL | 2 × 10 ml |
Aplikasyon
1.LAMP izotèmik anplifikasyon
2.DNA strand sèl reyaksyon deplasman
3.High sekans jèn GC
4.DNA sekans nan nivo nanogram.
Kondisyon Depo
Transpò anba 0 ° C epi yo dwe estoke nan -25 ° C ~ -15 ° C.
Definisyon inite
Yon inite defini kòm kantite anzim ki enkòpore 25 nmol dNTP nan materyèl asid ensolubl nan 30 minit nan 65 ° C.
Kontwol kalite
1.Pwoteyin pite essai (SDS-PAGE):Pite Bst DNA polymerase V2 se ≥99% detèmine pa analiz SDS-PAGE lè l sèvi avèk deteksyon Coomassie Blue.
2.Aktivite eksonukleaz:Enkubasyon yon reyaksyon 50 μL ki gen yon minimòm de 8 U Bst DNA polymerase V2 ak 1 μg λ -Hind Ⅲ dijere ADN pou 16 èdtan nan 37 ℃ rezilta nan pa gen okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
3.Aktivite Nickase:Enkubasyon yon reyaksyon 50 μL ki gen yon minimòm de 8 U Bst DNA polymerase V2 ak 1 μg ADN pBR322 pou 16 èdtan nan 37 °C rezilta nan pa gen okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
4.Aktivite RNase:Enkubasyon yon reyaksyon 50 μL ki gen yon minimòm de 8 U Bst DNA polymerase V2 ak 1.6 μg MS2 RNA pou 16 èdtan nan 37 ° C rezilta nan pa gen okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
5.E. coli ADN:Yo teste 120 U Bst DNA polymerase V2 pou prezans ADN jenomik E. coli lè l sèvi avèk TaqMan qPCR ak primè espesifik pou E. coli 16S rRNA locus la.Kontaminasyon ADN jenomik E. coli a se ≤1 Kopi.
LAMP Reyaksyon
| Eleman | 25μL |
| 10×HC Bst V2 tanpon | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM chak) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 vèt (25×)a | 1.0 μL |
| Premye melanjb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (san glisewol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Modèl | × μL |
| ddH₂O | Jiska 25 μL |
Nòt:
1) a.SYTOTM 16 Green (25 ×): Dapre bezwen eksperimantal, lòt koloran ka itilize kòm ranplasan;
2) b.Melanj Primer: jwenn nan melanje 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ak lòt volim.
Reyaksyon ak kondisyon
1 × HC Bst V2 Tanpon, tanperati enkubasyon an se ant 60 ° C ak 65 ° C.
Inaktivasyon chalè
80 °C, 20min
