CHO HCP ELISA Twous
Yo itilize yon metòd ELISA imunosorban yon sèl etap nan tès sa a.Echantiyon ki gen CHOK1 HCP ansanm reyaji ak antikò kabrit anti-CHOK1 ki make HRP ak antikò anti-CHOK1 kouvwi sou plak ELISA, finalman fòme yon konplèks sandwich nan antikò solid-faz antikò-HCP ki make.Ou ka retire antijèn-antikò ki pa konekte lè w lave plak ELISA la.Substra TMB a ajoute nan pi a pou reyaksyon ase.Devlopman koulè a sispann apre yo fin ajoute solisyon an sispann, ak valè OD oswa absòbe solisyon reyaksyon an nan 450/650nm li ak yon lektè microplate.Valè OD oswa valè absorbans pwopòsyonèl ak kontni HCP nan solisyon an.Apati sa a, konsantrasyon HCP nan solisyon an ka kalkile dapre koub estanda a.
Aplikasyon
Yo itilize twous sa a pou detekte quantitativeman kontni résidus pwoteyin selil lame CHOK1 nan echantiyon yo.
Copozan
| S/N | Eleman | Konsantrasyon | Kondisyon Depo |
| 1 | CHOK1 HCP Creole | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20℃, pwoteje kont limyè |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, pwoteje kont limyè |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Sispann solisyon | NA | RT |
| 6 | Sealers mikroplak | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Segondè adsorption pre-kouch Plak | NA | 2-8 ℃ |
Ekipman obligatwa
| Consommables / Ekipman | Faktori | Katalòg |
| Lektè Microplate | Aparèy molekilè | Spectra Max M5, M5e, oswa ekivalan |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, oswa ekivalan |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Digital, oswa ekivalan |
Depo ak estabilite
1.Transpò nan -25 ~ -15 ° C.
2.Kondisyon depo yo jan yo montre nan Tablo 1;konpozan 1-2 yo estoke ≤–20 °C, 5-6 yo estoke RT, 3、4、7、8 yo estoke nan 2-8℃;peryòd validite a se 12 mwa.
Paramèt pwodwi
1.Sansiblite: 1ng/mL
2.Ranje deteksyon: 3-100ng/mL
3.Precision: intra-essai CV≤ 10%, entè-essay CV≤ 15%
4.Kouvèti HCP: > 80%
5.Espesifik: Twous sa a se inivèsèl paske li espesyalman reyaji ak CHOK1 HCP endepandan de pwosesis pou pirifye.
Preparasyon reyaktif
1.PBST 0.05%
Pran 15 ml 20 × PBST 0.05%, dilye nan ddH2O, ak fè jiska 300 ml.
2.1.0% BSA
Pran 1g BSA nan boutèy la epi delye nan 100 ml PBST 0.05%, melanje byen jiskaske li fonn nèt, epi estoke nan 2-8 °C.Tanpon dilution prepare a valab pou 7 jou.Li rekòmande pou prepare jan sa nesesè.
3.Solisyon deteksyon 2μg/mL
Pran 48μL nan 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP epi delye nan 11,952μL nan 1% BSA pou jwenn yon konsantrasyon final nan solisyon deteksyon 2μg/mL.
4.QC ak Preparasyon Estanda CHOK1 HCP
| Tib Non. | Orijinal | Konsantrasyon | Volim | 1% BSA | Volim total | Final |
| A | Estanda | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tablo: Preparasyon QC ak estanda
Pwosedi esè
1.Prepare reyaktif yo jan sa endike nan "Preparasyon reyaktif" pi wo a.
2.Pran 50μL nan estanda, echantiyon ak QCs (al gade nan Tablo 3) nan chak pi, Lè sa a, ajoute 100μL nan solisyon Deteksyon (2μg / mL);Kouvri plak ak sele, epi mete plak ELISA a sou thermomixer la.Enkube nan 500rpm, 25±3 ℃ pou 2 èdtan.
3.Envèse mikroplak la nan koule a epi jete solisyon an kouch.Pipete 300μL PBST 0.05% nan chak pi pou lave plak ELISA a epi jete solisyon an, epi repete lave a 3 fwa.Envèse plak la sou yon sèvyèt papye pwòp epi sèk.
4.Ajoute 100μL substra TMB (gade Tablo 1) nan chak pi, sele plak ELISA a, epi enkube nan fè nwa a 25±3 ℃ pou 15 min.
5.Pipete 100μL solisyon sispann nan chak pi.
6.Mezire absorpsyon nan longèdonn 450/650nm ak lektè microplate.
7.Analize done pa SoftMax oswa lojisyèl ekivalan.Trase koub estanda lè l sèvi avèk yon modèl regresyon lojistik kat paramèt.
Egzanp koub estanda
REMAK: Si konsantrasyon HCP nan echantiyon an depase limit siperyè koub estanda a, li bezwen byen dilye ak tanpon dilution anvan tès la.
NÒT
Solisyon an sispann se 2M asid silfirik, tanpri okipe ak atansyon pou fè pou evite pwojeksyon!
