DNase I
DNase I (Deoxyribonukleaz I) se yon endodeoxyribonukleaz ki ka dijere ADN sèl oswa doub.Li rekonèt ak fendo lyezon fosfodiestè yo pou pwodui monodeoksinukleotid oswa oligodeksinukleotid sèl-oswa doub ak gwoup fosfat nan 5′-tèminal la ak idroksil nan 3′-tèminal la.Aktivite DNase I depann de Ca2 + epi yo ka aktive pa iyon metal divalan tankou Mn2 + ak Zn2 +.5mM Ca2+ pwoteje anzim nan idroliz.Nan prezans Mg2 +, anzim la te kapab rekonèt owaza epi fann nenpòt sit sou nenpòt strand ADN.Nan prezans Mn2 +, yo ka rekonèt doub fil ADN yo ansanm ak fennen nan prèske menm sit la pou fòme fragman ADN plat oswa fragman ADN fen kolan ak 1-2 nukleotid ki vle pèse anvlòp.
Pwopriyete pwodwi
Bovin Pankreyas DNase mwen te eksprime nan sistèm ekspresyon ledven ak pirifye.
Copozan
Eleman | Volim | |||
0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
DNase I, RNase-gratis | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
10×DNase I tanpon | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10mL |
Transpò ak Depo
1. Estabilite Depo: - 15 ℃ ~ -25 ℃ pou depo;
2.Transpò Estabilite: Transpò anba pake glas;
3. Apwovizyone nan: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% gliserin, pH 7.6 nan 25 ℃.
Definisyon inite
Yon inite defini kòm kantite anzim ki pral konplètman degrade 1 µg ADN pBR322 nan 10 minit nan 37°C.
Kontwol kalite
RNase:5U nan DNase I ak 1.6 μg MS2 RNA pou 4 èdtan nan 37 ℃ pa bay okenn degradasyon jan yo detèmine pa elektwoforèz jèl agarose.
Bakteri Endotoxin:LAL-tès, dapre Chinwa Pharmacopoeia IV 2020 edisyon, metòd tès limit jèl, règ jeneral (1143).Kontni endotoxin bakteri yo ta dwe ≤10 EU/mg.
Enstriksyon pou itilize
1.Prepare solisyon reyaksyon an nan tib RNase-gratis dapre pwopòsyon ki endike anba a:
Eleman | Volim |
RNA | X μg |
10 × DNase I Tanpon | 1 μL |
DNaz I, RNase-gratis (5U/μL) | 1 U pou chak μg RNA |
ddH2O | Jiska 10 μL |
2.37 ℃ pou 15 minit;
3.Ajoute tanpon revokasyon an pou sispann reyaksyon an, epi chofe a 65 ℃ pou 10 minit pou inaktive DNase I. Yo ka itilize echantiyon an dirèkteman pou pwochen eksperyans transkripsyon an.
Nòt
1.Sèvi ak 1U DNase I pou chak μg RNA, oswa 1U DNase I pou mwens pase 1μg RNA.
2.EDTA ta dwe ajoute nan yon konsantrasyon final nan 5 mM pou pwoteje RNA soti nan degrade pandan inaktivasyon anzim.