Tanperati sansib UNG
Tanperati UNG (TS-UNG) se yon ekspresyon recombinant jwenn nan E. coli.Anzim nan katalize liberasyon uracil gratis ki soti nan ADN ki gen yon sèl ak doub ki gen uracil epi li inaktif kont RNA.Konpare ak anzim UNG konvansyonèl ki gen orijin jèn E. coli, anzim TS-UNG gen pi wo aktivite nan tanperati ki ba (20 ℃ ~ 37 ℃) epi li sansib nan tanperati a epi li fasil inaktive (50 ℃), evite degradasyon anplifikasyon ki gen dUTP. pwodwi nan tanperati chanm nan aktivite rezidyèl ki ka rete apre inaktivasyon anzim UNG konvansyonèl la.Se poutèt sa, anzim TS-UNG se pa sèlman apwopriye pou reyaksyon prevansyon kontaminasyon PCR, men tou, alimèt byen ak pwogram anplifikasyon RT-PCR epi yo ka itilize nan reyaksyon prevansyon kontaminasyon RT-PCR.
Aplikasyon Rekòmande
Anplifikasyon Prevansyon Kontaminasyon
Kondisyon Depo
-20 ° C pou depo alontèm, yo ta dwe melanje byen anvan ou itilize, evite souvan friz-degel.
Tanpon depo
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Definisyon inite
Kantite anzim ki nesesè pou degrade 1µg ADN sèl ki gen baz dU nan 1 èdtan nan 37°C se 1 inite aktivite (U).
Kontwol kalite
1.Pite elektwoforetik SDS-PAGE ki pi gran pase 98%
2.Aktivite degradasyon, kontwòl pakèt-a-pakèt, estabilite
3.Pa gen aktivite nukleaz ekzojèn, pa gen endonukleaz ekzojèn oswa kontaminasyon eksonukleaz.
Enstriksyon yo
Eleman | Volim (μL) | Final konsantrasyon |
10 × PCR tanpon (dNTP gratis, Mg²+gratis) | 5 | 1× |
dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
dUTP (ranplase dTTP) | - | 200-600 μM |
25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mm |
5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
Modèl | - | <1μg/reaksyon |
ddH₂O | Pou 50 | - |
Nòt: a: Si yo itilize pou qPCR/qRT-PCR, yo ta dwe ajoute pwofonde fliyoresan an nan sistèm reyaksyon an.Anjeneral, yon konsantrasyon primè final nan 0.2 μM ka bay bon rezilta;lè pèfòmans reyaksyon an se pòv, konsantrasyon Jadendanfan an ka ajiste nan seri a nan 0.2-1 μM.Anjeneral, konsantrasyon ankèt la optimize nan seri a nan 0.1-0.3 μM.Eksperyans gradyan konsantrasyon ka fèt pou jwenn pi bon konbinezon Jadendanfan ak pwofonde.
Nòt
1.Tanperati reyaksyon optimal nan anzim TS-UNG relativman ba, epi li ka optimize nan ranje 20 ℃ ~ 37 ℃, dòz la nan anzim ak tan reyaksyon an ka optimize nan ranje 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 min;ak anzim la ka inaktive nan pwosesis la nan transcription ranvèse.
2.Li apwopriye pou PCR ak RT-PCR pou anpeche kontaminasyon.
3.Evite friz-degel souvan, epi pa ekspoze a gwo fluctuations tanperati.
4.Jèn diferan yo dwe anplifye gen efikasite itilizasyon diferan nan dUTP ak sansiblite nan anzim UNG, Se poutèt sa, si itilizasyon sistèm UNG mennen nan yon diminisyon nan sansiblite deteksyon, sistèm reyaksyon an ta dwe ajiste ak optimize, si ou bezwen sipò teknik, tanpri kontakte. konpayi nou an.