Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (san glisewol)
Bst DNA polymerase V2 sòti nan Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, ki gen 5′→3′ ADN polymerase aktivite ak gwo aktivite ranplasman chèn, men pa gen aktivite 5′→3′ exonuclease.Bst DNA Polymerase V2 se depreferans apwopriye pou strand-deplasman, izotèmik anplifikasyon LAMP (Loop medyatè izotèmik anplifikasyon) ak sekans rapid.Bst DNA polymerase V2 se yon vèsyon cho kòmanse ki baze sou Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) ki te jwenn pa teknoloji modifikasyon revèsib, ki ka anpeche aktivite ADN polymerase nan tanperati chanm, kidonk sistèm reyaksyon an ka opere ak fòmile nan tanperati chanm pou anpeche pa. -anplifikasyon espesifik ak amelyore efikasite reyaksyon, ak vèsyon sa a ka lyofilize.Anplis de sa, aktivite li yo lage nan tanperati ki wo, kidonk pa gen okenn bezwen pou yon etap aktivasyon separe.
Eleman
| Eleman | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polymerase V2 (san glisewol) (8U/μL) | 0.2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 tanpon | 1.5 ml | 2 × 1.5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 ml | 2 × 1.5 mL | 2 × 10 ml |
Aplikasyon
1.LAMP izotèmik anplifikasyon
2.ADN seksyon sèl reyaksyon deplasman
3.Sekans jèn GC segondè
4.Sekans ADN nan nivo nanogram.
Kondisyon Depo
Transpò anba 0 ° C epi yo dwe estoke nan -25 ° C ~ -15 ° C.
Definisyon inite
Yon inite defini kòm kantite anzim ki enkòpore 25 nmol dNTP nan materyèl asid ensolubl nan 30 minit nan 65 ° C.
Kontwol kalite
1.Pwoteyin pite essai (SDS-PAGE):Pite Bst DNA polymerase V2 se ≥99% detèmine pa analiz SDS-PAGE lè l sèvi avèk deteksyon Coomassie Blue.
2.EndonukleazAktivite:Enkubasyon yon reyaksyon 50 μL ki gen yon minimòm de 8 U Bst DNA polymerase V2 ak 1 μg λDNA pou 16 èdtan nan 37 ℃ rezilta nan okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
3.Aktivite eksonukleaz:Enkubasyon yon reyaksyon 50 μL ki gen yon minimòm de 8 U Bst DNA polymerase V2 ak 1 μg λ -Hind Ⅲ dijere ADN pou 16 èdtan nan 37 ℃ rezilta nan pa gen okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
4.Aktivite Nickase:Enkubasyon yon reyaksyon 50 μL ki gen yon minimòm de 8 U Bst DNA polymerase V2 ak 1 μg ADN pBR322 pou 16 èdtan nan 37 °C rezilta nan pa gen okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
5.Aktivite RNase:Enkubasyon yon reyaksyon 50 μL ki gen yon minimòm de 8 U Bst DNA polymerase V2 ak 1.6 μg MS2 RNA pou 16 èdtan nan 37 ° C rezilta nan pa gen okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
6.E. coliADN:Yo teste 120 U Bst DNA polymerase V2 pou prezans ADN jenomik E. coli lè l sèvi avèk TaqMan qPCR ak primè espesifik pou E. coli 16S rRNA locus la.Kontaminasyon ADN jenomik E. coli a se ≤1 Kopi.
LAMP Reyaksyon
| Eleman | 25μL |
| 10×HC Bst V2 tanpon | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM chak) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 vèt (25×)a | 1.0 μL |
| Premye melanjb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (san glisewol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Modèl | × μL |
| ddH₂O | Jiska 25 μL |
Nòt:
1) a.SYTOTM 16 Green (25 ×): Dapre bezwen eksperimantal, lòt koloran ka itilize kòm ranplasan;
2) b.Melanj Primer: jwenn nan melanje 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ak lòt volim.
Reyaksyon ak kondisyon
1 × HC Bst V2 Tanpon, tanperati enkubasyon an se ant 60 ° C ak 65 ° C.
Inaktivasyon chalè
80 ° C, 20 minit
