2×Sensi Direct Premix-UNG (sonde qPCR)
Non chat: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) fèt pou fè PCR dirèkteman nan echantiyon san yo pa fè ekstraksyon ADN oswa preparasyon echantiyon.Reyaktif sa a konsiste de ADN polymerase cho, uracil ADN glikozilaz (UNG), RNase Inhibitor, MgCl.2, dNTPs (ak dUTP olye de dTTP), ak estabilize, pou PCR quantitative (qPCR).Reyaktif sa a prefòme segondè tolerans inibitè, e konsa li ka dirèkteman aplike nan deteksyon echantiyon tankou prelèvman gòj, krache, san antye anti-koagulasyon, plasma, ak serom san ekstraksyon ADN.Reyaktif la sèvi ak tanpon propriétaires pou qPCR ak anzim melanje nan anti-inhibitory DNA polymerase ak anzim UNG.Se poutèt sa, li ka jwenn yon bon anplifikasyon nan jèn sib nan echantiyon ki gen inhibiteurs ak anpeche fo anplifikasyon pozitif ki te koze pa PCR rezidyèl ak polisyon ayewosòl.Réactif sa a se konpatib ak pi fliyoresan enstriman PCR quantitative, tankou Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ak sou sa.
Eleman
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect Premix tanpon (dUTP)
Kondisyon depo
Tout eleman yo ta dwe kenbe nan -20 ℃ pou depo alontèm ak 4 ℃ pou jiska 3 mwa.Tanpri melanje byen apre dekonjle epi santrifuje anvan w itilize.Evite souvan friz-degel.
Pwotokòl monte bisiklèt
| Etap | Tanperati | Tan | Sik |
| Dijesyon | 50℃ | 2min | 1 |
| Aktivasyon Polymerase | 95℃ | 1-5min | 1 |
| Denatire | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
| Recuit / Ekstansyon | 56-64℃ | 20-60s |
Pipetting Enstriksyon
| Reyaktif | Volim pou chak reyaksyon | Volim pa reyaksyon | Final Konsantrasyon |
| 2×SensiDirect Premix tanpon (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Egzanp3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Volim total | 25 μL | 50 μL | - |
1. Konsantrasyon final la nan jadendanfan se nòmalman 0.2μM.Pou pi bon rezilta, konsantrasyon Jadendanfan an ka optimize nan seri a nan 0.2-1μM.
2. Anjeneral, konsantrasyon ankèt la ka optimize nan seri 0.1-0.3μM.Konsantrasyon pi bon nan sond la gen rapò ak enstriman anplifikasyon PCR an tan reyèl, kalite pwofonde, ak kalite sibstans ki sou etikèt fliyoresan.Tanpri gade manyèl enstriman an oswa egzijans espesifik chak pwofonde fliyoresan.
3. Diferan kalite echantiyon yo genyen diferan kalite ak kontni inibitè ak nimewo kopi jèn sib.Volim echantiyon an ta dwe konsidere pa kondisyon aktyèl la.Fè yon dilution nan echantiyon an lè w ajoute dlo san nukleaz oswa tanpon TE, si sa nesesè.
4. Volim rekòmande diferan echantiyon:
| Egzanp | Volim pou youn 50 μL reyaksyon | Maksimòm rapò |
| Antikoagule san antye | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serom | 10 μL | 20% |
| Prelèvman nan gòj | 10 μL | 20% |
| Saliv | 10 μL | 20% |
Kontwol kalite
1. Fonksyon deteksyon: sansiblite, espesifik ak repetibilite qPCR.
2. Pa gen aktivite nukleaz ekzojèn: pa gen endonukleaz ekzojèn ak polisyon eksonukleaz.
Nòt pwodwi
1. Pwodui sa a anplwaye yon kalite roman ADN polymerase cho-start, ki ka aktive nan 1-5 minit. Depi tanpon reyaksyon li yo te optimize, li pi apwopriye pou PCR quantitative doub oswa miltip fluoresans lè l sèvi avèk metòd pwofonde.
2. Si valè Rn anplifikasyon PCR a twò ba oswa anplifikasyon an evidamman anpeche, diminye kantite echantiyon an, ogmante volim reyaksyon oswa dilusyon anvan echantiyon an ka amelyore rezilta yo.
3. Koleksyon san, saliv, pipi, gòj, elatriye ta dwe swiv kondisyon kritè klinik yo, epi yo ka itilize echantiyon fre pou anpeche degradasyon asid nikleyik.
4. Depi diferan anplikon yo gen efikasite itilizasyon diferan nan dUTP ak sansiblite nan UNG, reyaktif yo ta dwe optimize si sansiblite deteksyon an diminye lè w ap itilize sistèm UNG.Tanpri kontakte nou pou sipò teknik si sa nesesè.
5. Pou evite anplifikasyon pwodwi PCR transfere ant reyaksyon yon sèl etap, yo egzije zòn eksperimantal dedye ak pipèt pou anplifikasyon.Opere ak gan epi chanje souvan epi pa louvri tib reyaksyon an apre anplifikasyon PCR.
