5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plis-UNG
Non chat: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) se yon melanj ki baze sou pwofonde yon sèl-tib ki trè estab ki apwopriye pou yon sèl etap ranvèse transcription ak PCR quantitative (qRT-PCR).Li sipòte pre-melanje nan primè ak sond epi rete estab apre depo tan long nan tanperati ki ba.Echantiyon pou teste a kapab ajoute dirèkteman lè w ap itilize, san adisyonèl tib ouvèti/pipèt operasyon.Pwodui sa a bay konpozan, pa egzanp, cho-start DNA polymerase, M-MLV, chalè-labile uracil DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (ak dUTP olye de dTTP), ak estabilize.Avèk transkriptaz ranvèse anplifikasyon rapid jenetikman modifye ak ADN polymerase, li posib pou konplete anplifikasyon PCR la nan 20-40 minit.Reyaktif sa a sèvi ak tanpon espesyal pou qPCR ak anzim melanje nan anzim anplifikasyon anti-inhibitory ak anzim UNG.Se poutèt sa, li ka jwenn bon anplifikasyon nan jèn sib epi anpeche fo anplifikasyon ki te koze pa PCR rezidyèl ak polisyon aerosol.Reyaktif sa a se konpatib ak pifò enstriman PCR fluoresans ki soti nan manifaktirè yo tankou Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ak Roche.
Eleman
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix
2.5 × Neoscript Fast RT Premix tanpon (dUTP)
Kondisyon Depo
Tout eleman yo ta dwe kenbe nan -20 ℃ pou depo alontèm ak 4 ℃ pou jiska 3 mwa.Tanpri melanje byen apre dekonjle epi santrifuje anvan w itilize.Evite souvan friz-degel.
Preparasyon sistèm reyaksyon qRT-PCR
| Eleman | 25μLSistèm | 50μLSistèm | Final Konsantrasyon |
| 5 × Neoscript Fast RT Premix tanpon (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1μL | 2μL | 1× |
| Modèl RNAb | – | – | – |
| ddH2O | Jiska 25μL | Jiska 50μL | – |
1) a.Konsantrasyon final la nan jadendanfan se nòmalman 0.2μM.Pou pi bon rezilta, konsantrasyon Jadendanfan an ka optimize nan seri a nan 0.2-1μM.Anjeneral, konsantrasyon ankèt la ka optimize nan seri a nan 0.1-0.3μM.
2) b.Lè w ap itilize yon Pwosedi PCR rapid, ogmante konsantrasyon primè ak sond ka lakòz pi bon rezilta anplifikasyon, epi yo ta dwe optimize rapò yo kòmsadwa.
3) Diferan kalite echantiyon yo genyen diferan kalite ak kontni inibitè ak nimewo kopi jèn sib.Volim echantiyon an ta dwe konsidere pa kondisyon aktyèl la.Fè yon dilution nan echantiyon an ak dlo san nukleaz oswa tanpon TE, si sa nesesè.
Reyaksyon Ckondisyon
| Pwosedi PCR regilye | Pwosedi rapid PCR | ||||||
| Pwosedi | Tanp. | Tan | Sik | Pwosedi | Tanp. | Tan | Sik |
| Ranvèse transcription | 50℃ | 10-20 minit | 1 | Ranvèse transcription | 50℃ | 5min | 1 |
| Polymerase Aktivasyon | 95℃ | 1-5 minit | 1 | Polymerase Aktivasyon | 95℃ | 30s | 1 |
| Denaturasyon | 95℃ | 10-20s | 40-50 | Denaturasyon | 95℃ | 1-3s | 40-50 |
| Recuit epi Ekstansyon | 56-64℃ | 20-60s | Recuit epi Ekstansyon | 56-64℃ | 3-20s | ||
Kontwol kalite
1.Deteksyon fonksyon: sansiblite, espesifik ak repetibilite qPCR.
2.Pa gen aktivite nukleaz ekzojèn: pa gen endonukleaz ekzojèn ak polisyon exonuclease.
Nòt
1.Pousantaj anplifikasyon ADN polymerase rapid pa mwens pase 1kb/10s.Diferan enstriman PCR yo gen diferan chofaj ak refwadisman vitès, mòd kontwòl tanperati ak konduktiviti tèmik, epi konsa optimize konsantrasyon Jadendanfan/sond ou ak metòd kouri an konbinezon ak enstriman espesifik PCR rapid ou esansyèl.
2.Pwodui sa a fè aplikasyon lajè, epi li apwopriye pou dyagnostik molekilè wo sansiblite.Metòd PCR twa etap rekòmande pou primè ki gen tanperati rkwir ki ba oswa pou anplifikasyon fragman long plis pase 200 bp.
3.Depi diferan anplikon gen diferan efikasite itilizasyon dUTP ak diferan sansiblite nan UNG, reyaktif yo ta dwe optimize si sansiblite deteksyon an diminye lè w ap itilize sistèm UNG.Tanpri kontakte nou pou sipò teknik si sa nesesè.
4.Pou evite anplifikasyon pwodwi PCR transfere yo, yo egzije zòn eksperimantal ak pipèt dedye pou anplifikasyon.Opere ak gan epi chanje souvan epi pa louvri tib PCR la apre anplifikasyon.
