M-MLV ranvèse transkriptaz
RevScript ranvèse transkriptaz jwenn pa teknoloji jeni jenetik.Li gen pi gwo kapasite sentèz cDNA, estabilite tèmik ak limit tanperati reyaksyon (jiska 60 ° C).Pwodwi cDNA sentèz la se jiska 10 kb.Li amelyore afinite modèl yo epi li apwopriye pou transkripsyon ranvèse modèl RNA ak estrikti segondè konplèks oswa jèn kopi ki ba.
Eleman
| Eleman | HC2003B (10,000U) | HC2003B (5*10,000U) | HC2003B (200,000U) |
| RevScript Reverse Transcriptase (200U/μL) | 50 μL | 5 × 50 μL | 1 ml |
| 5 × RevScript tanpon | 250 μL | 1.25 ml | 5 ml |
Kondisyon Depo
Pwodwi sa a ta dwe estoke nan -25 ° C ~ -15 ° C pou 2 zan.
Definisyon inite
Yon inite enkòpore 1 nmol nan dTTP nan materyèl asid-ensolubl nan 10 minit nan 37 ° C lè l sèvi avèk Oligo (dT) kòm primè.
Enstalasyon reyaksyon
1.Denaturasyon nan modèl RNA (Etap sa a se opsyonèl, denaturasyon nan modèl RNA ede louvri estrikti segondè yo, ki pral amelyore pwodiksyon an nan premye strand cDNA la.)
| Eleman | Volim (μL) |
| RNase gratis ddH2O | Pou 13 |
| Oligo (dT)18 (50 μmol/L) oswa Primè o aza (50 μmol/L) Oswa Gene Specific Primers (2 μmol/L) | 1 |
| oswa 1 | |
| oswa 1 | |
| RNA modèl | X a |
Nòt:
1) a: RNA total: 1-5 ug oswa mRNA: 1-500 ng
2) Enkube nan 65 ° C pou 5 minit, Lè sa a, transfere sou glas imedyatman nan fredi pou 2 minit.Brèf santrifijasyon pou kolekte likid reyaksyon, ajoute solisyon reyaksyon transcription inverse jan yo montre nan tablo ki anba la a.Pipète dousman pou melanje.
1.Preparasyon melanj reyaksyon an (20 μL volim)
| Eleman | Volim (μL) |
| Melanj etap anvan yo | 13 |
| 5 × tanpon | 4 |
| dNTP Melanj (10nmol/L) | 1 |
| Transkriptaz ranvèse (200 U/μL) | 1 |
| Inibitè RNase (40 U / μL) | 1 |
1.Fè reyaksyon an nan kondisyon sa yo:
| Tanperati (°C) | Tan |
| 25 °Ca | 5min |
| 42 °Cb | 15-30 minit |
| 85 °Cc | 5min |
Nòt:
1) a.Enkubasyon nan 25 ° C pou 5 minit se sèlman pou itilize hexamers yo o aza.Tanpri sote etap sa a lè w ap itilize Oligo (dT)18oswa Gene Specific Primer.
2) b.Tanperati transcription ranvèse rekòmande a se 42 ° C, Pou modèl ki gen estrikti segondè konplike oswa kontni GC segondè, li rekòmande pou ogmante tanperati reyaksyon a 50-55 ° C.
3) c.Chofe a 85 ° C pou 5 minit pou inaktive transkriptaz ranvèse.
4) Pwodwi a ka dirèkteman itilize nan reyaksyon PCR oswa qPCR, oswa estoke nan -20 ° C pou depo kout tèm.Li rekòmande pou aliguot pwodwi yo ak magazen nan -80 ° C pou depo alontèm.Evite souvan friz-degel.
5) Pwodwi a apwopriye pou RT-qPCR yon sèl etap, li rekòmande pou ajoute 10-20 U transkriptaz ranvèse pou chak sistèm reyaksyon 25μL, oswa piti piti ogmante kantite transkriptaz ranvèse selon sitiyasyon aktyèl la.
Nòt
1.Tanpri kenbe zòn eksperimantal la pwòp;Yo ta dwe mete gan pwòp ak mask pandan operasyon an.Tout consommables yo itilize nan eksperyans la ta dwe RNase gratis pou anpeche kontaminasyon RNase.
2.Tout pwosedi yo ta dwe fèt sou glas pou anpeche degradasyon RNA.
3.Yo rekòmande echantiyon RNA kalite siperyè pou asire efikasite ranvèse transcription.
4.Pwodwi sa a se pou itilizasyon rechèch sèlman.
5.Tanpri opere ak rad laboratwa ak gan jetab, pou sekirite ou.
