Superstart qPCR Premix plis-UNG
Non chat: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG se yon reyaktif espesyalize ki fèt pou reyaksyon kalitatif ak quantitative PCR an tan reyèl lè l sèvi avèk deteksyon ki baze sou sond, devlope espesyalman pou pwosesis lyofilizasyon.Li genyen ladan li yon roman anzim cho-start Hotstart Taq plus (DG), ki gen aktivite anzim Taq li yo sele nan tanperati chanm, efektivman anpeche anplifikasyon ki pa espesifik ki te koze pa rkwit ki pa espesifik oswa fòmasyon dimè Jadendanfan anba kondisyon tanperati ki ba, kidonk amelyore. espesifik nan reyaksyon anplifikasyon.Reyaktif sa a sèvi ak yon tanpon espesifik qPCR optimize ak UNG/dUTP sistèm anti-kontaminasyon pou reyalize rapid cho-kòmanse, anpil amelyore efikasite ak sansiblite reyaksyon qPCR.Li ka jwenn bon koub estanda nan yon pakèt domèn zòn kantite ak byen fè quantitating, efektivman anpeche fo anplifikasyon pozitif ki te koze pa pwodwi PCR rezidyèl oswa kontaminasyon aerosol.Reyaktif sa a konpatib ak pifò enstriman PCR fliyoresan ki soti nan manifakti yo tankou Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ak Roche elatriye, epi li montre bon estabilite nan fòm lyofilize.
Konpozisyon reyaktif
1. 5×HotstartPremix plis-UNG (Mg2+gratis) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (si ou vle)
Kondisyon Depo
Depo alontèm nan -20 ℃;ka estoke nan 4 ℃ pou jiska 3 mwa.Melanje byen anvan ou sèvi akevite repete konjelasyon ak dekonjle.
Pwotokòl monte bisiklèt
| Pwosedi | Tanp. | Tan | Sik |
| Dijesyon | 50℃ | 2 min | 1 |
| Aktivasyon Polymerase | 95℃ | 1 ~ 5 min | 1 |
| Denatire | 95℃ | 10 ~ 20 s | 40-50 |
| Recuit ak ekstansyon | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR likid reyaksyon SyPreparasyon tij
|
Konpozisyon |
25µL Volim |
50µL Volim |
Final Konsantrasyon |
| 5×HotstartPremix plis-UNG(Mg2+gratis) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mm |
| 4×lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Modèl ADN3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Pou 25µL | Pou 50µL | —— |
1. Yon konsantrasyon final 0.2μM pou primè anjeneral bay bon rezilta;lè pèfòmans reyaksyon se pòv, ajiste konsantrasyon Jadendanfan nan seri a nan 0.2-1μM jan sa nesesè.Se konsantrasyon sond tipikman optimize nan seri a nan 0.1-0.3μM atravè eksperyans gradyan jwenn konbinezon optimal.
2. Nimewo kopi jèn sib ki genyen nan diferan kalite modèl yo varye;si sa nesesè, dilution gradyan ka fèt pou detèmine kantite pi bon modèl adisyon.
3. Sistèm sa a ka lyofilize;lè kliyan sèvi ak sistèm sa a san kondisyon lè w konjele-seche, yo ka ajoute 4 × lyoprotectant oaza, si gen pwodwi friz-seche yo mande, pandan reyaktif likid etap validasyon pèfòmans pwodwi, li dwe ajoute 4 × lyoprotectant asire konsistans ak eleman yo sistèm lyofilize. ak efè.
Lè sistèm nan itilized pou friz-seche, prepare a sistèm as sa ki annapre yo:
| Konpozisyon | 25µL Sistèm reyaksyon |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4×lyoprotectant | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Pou 18 ~ 20µL |
* Si yo bezwen lòt sistèm pou siye friz, tanpri konsilte separeman.
Pwosesis lyofilizasyonss
| Pwosedi | Tanp. | Tan | Kondisyon | Presyon |
| Pre-konjelasyon | 4℃ | 30 min | Kenbe |
1 atm |
| -50℃ | 60 min | Refwadisman | ||
| -50℃ | 180 min | Kenbe | ||
| Prensipal Siye | -30℃ | 60 min | Chofaj |
Ultim vakyòm |
| -30℃ | 70 min | Kenbe | ||
| Segondè Siye | 25℃ | 60 min | Chofaj |
Ultim vakyòm |
| 25℃ | 300 min | Kenbe |
2. Pwosesis lyofilizasyon ki anwo a se pou referans sèlman.Diferan kalite pwodwi ak diferan friz-secheur gen paramèt diferan, kidonk ajisteman yo ka fè selon aktyèlkondisyon pandan itilizasyon.
3. Pwosesis lyofilizasyon diferan ka apwopriye pou diferan gwosè pakèt lyofilizepwodwi yo, se konsa ase validation tès yo dwe fèt lè yo itilize pou pwodiksyon gwo echèl.
Enstriksyon pou itilize lyofilized poud
1. Santrifize yon ti tan poud lyofilize a;
2. Ajoute modèl asid nikleyik nan poud liofilize a epi ajoute dlo jiska 25µL;
3. Melanje byen pa santrifujasyon epi kouri sou machin.
Kontwol kalite:
1. Tès fonksyonèl: sansiblite, espesifik, repwodiksyon qPCR.
2. pa ekzogenous nuclease aktivite, pa exogenous endo/exonuclease kontaminasyon.
Enfòmasyon teknik:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG sèvi ak yon nouvo anzim cho kòmanse ki pèmèt rapid kòmanse cho nan 1 ~ 5 minit;atravè fòmilasyon tanpon espesyal li apwopriye pou reyaksyon PCR quantitative fluorescent multiplex.
2. Li gen pi wo espesifikasyon ki siyifikativman amelyore sansiblite fluoresans deteksyon limit PCR quantitative, fè koub anplifikasyon nòmalizasyon, valè fluoresans jwenn amelyorasyon evidan nan modèl konsantrasyon ki ba, apwopriye kòm segondè sansiblite fluoresans PCR deteksyon quantitative réactifs.
3. Pou primè ak pi ba tanperati rkwir oswa pi long pase fragman 200bp, metòd 3-etap rekòmande.
4. Efikasite itilizasyon dUTP ak sansiblite nan anzim UNG diferan pou jèn sib diferan, kidonk si w ap itilize sistèm UNG mennen nan yon diminisyon nan sansiblite deteksyon, yo ta dwe ajiste ak optimize sistèm reyaksyon an.Si yo bezwen sipò teknik tanpri kontakte konpayi nou an.
5. Sèvi ak zòn dedye ak pipèt anvan ak apre anplifikasyon, mete gan pandan operasyon epi ranplase yo souvan;pa louvri tib reyaksyon an apre PCR fini pou minimize kontaminasyon echantiyon pa pwodwi PCR yo.
