Sovaj Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase se yon ADN polymerase thermostable ki soti nan Thermus aquaticus YT-1, ki genyen yon aktivite 5′→3′ polymerase ak yon aktivite endonukleaz 5′.
Eleman
| Eleman | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq tanpon | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Kondisyon Depo
Transpò anba 0 ° C epi yo dwe estoke nan -25 ° C ~ -15 ° C.
Definisyon inite
Yon inite defini kòm kantite anzim ki enkòpore 15 nmol dNTP nan materyèl asid ensolubl nan 30 minit nan 75 ° C.
Kontwol kalite
1.Pwoteyin pite essai (SDS-PAGE):Pite Taq DNA polymerase te ≥95% detèmine pa analiz SDS-PAGE.
2.EndAktivite onukleaz:Yon minimòm de 5 U nan Taq DNA polymerase ak 1 μg λDNA pou 16 èdtan nan 37 ℃ rezilta nan okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
3.Aktivite eksonukleaz:Yon minimòm 5 U nan Taq DNA polymerase ak 1 μg λ -Hind Ⅲ dijere ADN pou 16 èdtan nan 37 ℃ rezilta nan okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
4.Aktivite Nickase:Yon minimòm 5 U Taq DNA polymerase ak 1 μg ADN pBR322 pou 16 èdtan nan 37°C pa gen okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
5.Aktivite RNase:Yon minimòm de 5 U Taq DNA polymerase ak 1.6 μg MS2 RNA pou 16 èdtan nan 37 ° C rezilta nan okenn degradasyon detekte jan yo detèmine.
6.E. coliADN:Yo teste 5 U Taq DNA polymerase pou prezans ADN jenomik E. coli lè l sèvi avèk TaqMan qPCR ak primè espesifik pou E. coli 16S rRNA locus la.Kontaminasyon ADN jenomik E. coli a se ≤1 Kopi.
7.Anplifikasyon PCR (5.0 kb Lambda ADN)- Yon reyaksyon 50 µL ki gen 5 ng ADN Lambda ak 5 inite Taq DNA Polymerase pou 25 sik anplifikasyon PCR rezilta nan pwodwi 5.0 kb espere.
Enstalasyon reyaksyon
| Eleman | Volim |
| Modèl ADNa | opsyonèl |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP Mix (10mM chak) | 1 μL |
| 10×Taq tanpon | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb | 0.25 μL |
| Dlo san nukleaz | Jiska 50 μL |
Nòt:
1) Konsantrasyon reyaksyon optimal diferan modèl diferan.Tablo ki anba la a montre itilizasyon modèl rekòmande sistèm reyaksyon 50 µL.
| ADN | Kantite lajan |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid oswa viral | 1 paj-1 ng |
2) Konsantrasyon optimal Taq DNA Polymerase ka varye ant 0.25 µL ~ 1 µL nan aplikasyon espesyalize.
ReyaksyonPwogram
| Etap | Tanperati(°C) | Tan | Sik |
| Premye denaturasyona | 95 ℃ | 5min | - |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Sik |
| Recuitb | 60 ℃ | 15 s | |
| Ekstansyon | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Ekstansyon final la | 72 ℃ | 5min | - |
Nòt:
1) Kondisyon denaturasyon inisyal la apwopriye pou pifò reyaksyon anplifikasyon epi li ka modifye selon konpleksite estrikti modèl la.Si estrikti modèl la konplèks, tan pre-denaturasyon an ka pwolonje a 5 - 10mins pou amelyore efè denaturasyon inisyal la.
2) Tanperati rkwit la dwe ajiste selon valè Tm Jadendanfan an, ki jeneralman mete nan 3 ~ 5 ℃ pi ba pase valè Tm Jadendanfan an;Pou modèl konplèks, li nesesè pou ajiste tanperati recuit ak pwolonje tan ekstansyon pou reyalize anplifikasyon efikas.
