Twous Genotype sourit

No chat: HCR2021A

Pwodui sa a se yon twous ki fèt pou idantifikasyon rapid jenotip sourit, ki gen ladan ekstraksyon ADN bit ak sistèm anplifikasyon PCR.Pwodwi a ka itilize pou anplifikasyon PCR dirèkteman nan ke sourit, zòrèy, zòtèy ak lòt tisi apre klivaj senp pa Lysis tanpon ak Proteinase k.Pa gen dijesyon lannwit lan, fè ekstraksyon phenol-chloroform oswa pirifikasyon kolòn, ki se senp epi rakousi tan konsome eksperyans yo.Pwodwi a apwopriye pou anplifikasyon fragman sib jiska 2kb ak reyaksyon PCR multiplex ak jiska 3 pè primè.2×Mouse Tissus Direct PCR Mix la gen enetikman Enjenieri ADN polymerase, Mg²⁺, dNTPs ak yon sistèm tanpon optimisé pou bay efikasite anplifikasyon segondè ak tolerans inibitè, pou reyaksyon PCR yo ka fèt lè yo ajoute modèl ak primè ak rehydrating pwodwi a 1×.Pwodwi PCR anplifye ak pwodui sa a gen yon baz "A" enpòtan nan fen 3′ epi yo ka itilize dirèkteman pou klonaj TA apre pirifikasyon.

Eleman

Kondisyon Depo

Pwodwi yo ta dwe estoke nan -25 ~ -15 ℃ pou 2 zan.Apre dekonjle, Lysis Buffer ka estoke nan 2 ~ 8 ℃ pou yon ti tan plizyè itilizasyon, epi melanje byen lè w ap itilize.

Aplikasyon

Pwodui sa a apwopriye pou analiz knockout sourit, deteksyon transjenik, jenotip ak sou sa.

Karakteristik

1.Senp operasyon: pa bezwen ekstrè ADN jenomik;

2.Aplikasyon lajè: apwopriye pou anplifikasyon dirèk nan tisi sourit divès kalite.

Enstriksyon yo

1.Liberasyon ADN jenomik

1) Preparasyon lysate

Lisat tisi yo prepare dapre kantite echantiyon sourit yo dwe lysed (lysate tisi yo ta dwe prepare sou plas dapre dòz la epi melanje byen pou itilize), ak pwopòsyon reyaktif ki nesesè pou yon sèl echantiyon se jan sa a:

2) Preparasyon echantiyon ak Lysis

Itilizasyon Tisi Rekòmande

Pran yon kantite apwopriye echantiyon tisi sourit nan tib santrifij pwòp, ajoute 200μL tisi fre lisat nan chak tib santrifij, toubiyon ak souke, Lè sa a, enkubasyon nan 55 ℃ pou 30 minit, ak Lè sa a, chofe nan 98 ℃ pou 3 minit.

3) Santrifugasyon

Souke lisat la byen epi santrifize nan 12,000 rpm pou 5 minit.Supernatant la ka itilize kòm modèl pou anplifikasyon PCR.Si modèl la nesesè pou depo, transfere supernatant la nan yon lòt tib santrifij esteril epi estoke nan -20 ℃ pou 2 semèn.

2.Anplifikasyon PCR

Retire 2×Mouse Tissus Direct PCR Mix nan -20 ℃ epi dekonjle sou glas, melanje tèt anba epi prepare sistèm reyaksyon PCR la dapre tablo sa a (opere sou glas):

Remak:

a) Kantite lajan an ajoute pa ta dwe depase 1/10 nan sistèm nan, epi si yo ajoute twòp, anplifikasyon PCR ka anpeche.

Kondisyon PCR rekòmande

Remak:

a) Tanperati rkwir: An referans a valè Tm nan Jadendanfan an, li rekòmande pou mete tanperati rkwit la nan pi piti valè Tm Jadendanfan an +3 ~ 5℃.

Pwoblèm komen ak solisyon

1.Pa gen bann vize

1) pwodwi liz twòp.Chwazi kantite ki pi apwopriye nan modèl, anjeneral, pa plis pase 1/10 nan sistèm nan;

2) Twò gwo gwosè echantiyon.Delye lysate la 10 fwa ak Lè sa a, anplifye, oswa diminye gwosè echantiyon an ak re-lysis;

3) Echantiyon tisi yo pa fre.Li rekòmande yo sèvi ak echantiyon tisi fre;

4) Pòv bon jan kalite Jadendanfan.Sèvi ak ADN jenomik pou anplifikasyon pou verifye kalite primè a epi optimize konsepsyon primè a.

2.Anplifikasyon ki pa espesifik

1) Tanperati a annealing twò ba ak nimewo sik la twò wo.Ogmante tanperati a recuit epi redwi kantite sik;

2) Konsantrasyon modèl twò wo.Diminye kantite modèl la oswa delye modèl la 10 fwa apre anplifikasyon;

3) Espesifik Jadendanfan pòv.Optimize konsepsyon Jadendanfan an.

Nòt

1.Pou evite kontaminasyon kwaze ant echantiyon yo, yo ta dwe prepare plizyè zouti pou pran echantiyon, epi yo ka netwaye sifas zouti yo ak 2% solisyon ipoklorit sodyòm oswa netwayaj asid nikleyik apre chak echantiyon si yo mande repete itilizasyon.

2.Li rekòmande pou itilize tisi sourit fre, ak volim echantiyon an pa ta dwe twò gwo pou evite afekte rezilta anplifikasyon yo.

3.Lysis Buffer ta dwe evite souvan friz-dekonjle, epi li ka estoke nan 2 ~ 8 ℃ pou itilizasyon miltip a kout tèm.Si yo estoke nan tanperati ki ba, presipitasyon ka rive, epi yo dwe konplètman fonn anvan ou itilize.

4.PCR Mix ta dwe evite souvan friz-degel, epi yo ka estoke nan 4 ℃ pou kout tèm repete itilize.

5.Pwodwi sa a se sèlman pou rechèch syantifik eksperimantal epi yo pa ta dwe itilize nan dyagnostik klinik oswa tretman.