Rnase Inhibiteur
Murine RNase inhibitor se yon inibitè RNase murin recombinant eksprime ak pirifye nan E.coli.Li mare ak RNase A, B oswa C nan yon rapò 1:1 atravè lyezon ki pa kovalan, kidonk anpeche aktivite twa anzim yo epi pwoteje RNA kont degradasyon.Sepandan, li pa efikas kont RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H oswa RNase soti nan Aspergillus.Murine RNase inhibitor te teste pa RT-PCR, RT-qPCR ak IVT mRNA, e li te konpatib ak divès kalite transkriptaz ranvèse komèsyal, ADN polymerases ak RNA polymerases.
Konpare ak inibitè RNase imen, inibitè RNase murin pa gen de sistein ki trè sansib a oksidasyon ki lakòz inaktivasyon inibitè a.Sa fè li estab nan konsantrasyon ki ba nan DTT (mwens pase 1 mM).Karakteristik sa a fè li apwopriye pou itilize nan reyaksyon kote gwo konsantrasyon DTT se negatif nan reyaksyon an (egzanp an tan reyèl RT-PCR).
Aaplikasyon
Pwodui sa a ka lajman itilize nan nenpòt eksperyans kote entèferans RNase posib pou evite degradasyon RNA, tankou:
1.Sentèz premye fil cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, elatriye.
2.Pwoteje RNA kont degradasyon pandan transkripsyon/tradiksyon in vitro (egzanp, sistèm replikasyon viral in vitro).
3.Anpèchman aktivite RNase pandan separasyon RNA ak pirifikasyon.
Kondisyon Depo
Pwodwi a ka estoke nan -25～- 15 ℃, valab pou 2 zan.
Tanpon depo
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT ak 50% gliserin.
Definisyon inite
Kantite inibitè murin RNase ki nesesè pou anpeche aktivite 5ng ribonukleaz A pa 50% te defini kòm yon inite (U).
Pwa molekilè nan pwoteyin
Pwa molekilè inibitè RNase murin se 50 kDa.
Kontwol kalite
Egzonukleaz Aktivite:
40 U nan inibitè RNase murin ak 1 μg λ -Hind III dijere ADN nan 37 ℃ pou 16 èdtan pa bay okenn degradasyon jan yo detèmine pa elektwoforèz jèl agarose.
Aktivite endonukleaz:
40 U nan inibitè RNase murin ak 1μ g λ ADN nan 37 ℃ pou 16 èdtan pa bay okenn degradasyon jan yo detèmine pa elektwoforèz jèl agarose.
Nicking Aktivite:
40U nan inibitè RNase murin ak 1μ g pBR322 nan 37 ℃ pou 16 èdtan pa bay okenn degradasyon jan yo detèmine pa elektwoforèz jèl agarose.
RNase Aktivite:
40U nan inibitè RNase murin ak 1.6μ g MS2 RNA pou 4 h nan 37 ℃ pa bay okenn degradasyon jan yo detèmine pa elektwoforèz jèl agarose.
E.coli ADN:
Yo teste 40 U nan inibitè RNase murin pou prezans ADN jenomik E. coli lè l sèvi avèk TaqMan qPCR ak primè espesifik pou E. coli 16S rRNA locus la.Kontaminasyon ADN jenomik E. coli se ≤ 0.1 pg/40 U.
Notes
1.Osilasyon vyolan oswa brase ap mennen nan inaktivasyon anzim.
2. Ranje tanperati pi gwo sa a inibitè a te 25-55 ℃, epi li te inaktive nan 65 ℃ ak pi wo.
3. Aktivite yo nan RNase H, RNase 1 ak RNase T1 pa te inibit pa murin RNase inhibitor.
4.Anpèchman nan aktivite RNase yo te jwenn nan yon pakèt domèn pH (pH 5-9 yo te tout aktif), epi yo te obsève aktivite ki pi wo a nan pH 7-8.
5.Depi ribonukleaz tipikman kenbe aktivite nan kondisyon denaturasyon, yo dwe pran prekosyon pou fè pou evite denatire molekil RNase Inhibitor ki te konplèks ak yon ribonukleaz.Pou anpeche liberasyon ribonukleaz aktif, tanperati ki pi gran pase 50 °C ak konsantrasyon segondè nan ure oswa lòt ajan denaturasyon yo ta dwe evite.
