Uracil ADN glikozilaz
Uracil-DNA Glycosylase (UNG oswa UDG) se yon script recombinant nan E.coli ak yon pwa molekilè 25 kDa.Li katalize liberasyon uracil gratis nan uracil ki gen yon sèl ak doub-bloke ADN, epi li inaktif kont RNA, epi li ka itilize yo anpeche kontaminasyon nan pwodwi anplifikasyon PCR.Prensip aksyon an baze sou lefèt ke si dUTP ranplase dTTP nan reyaksyon PCR la epi yo fòme yon pwodwi anplifikasyon PCR ki gen baz dU, anzim la ka oaza kraze kosyon glikozidik U baz nan yon sèl-bloke ak doub-bloke. ADN ak degrade pwodwi anplifikasyon PCR la.
Aplikasyon Rekòmande
Anplifikasyon Prevansyon Kontaminasyon
Kondisyon Depo
-20 ° C pou depo alontèm, yo ta dwe melanje byen anvan ou itilize, evite souvan friz-degel.
Tanpon depo
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Definisyon inite
Kantite anzim ki nesesè pou degrade 1µg ADN ki gen yon sèl chenn ki gen baz dU nan 1 èdtan nan 37°C se 1 inite.
Kontwol kalite
1.Pite elektwoforetik SDS-PAGE ki pi gran pase 98%
2.Sansiblite anplifikasyon, kontwòl pakèt-a-pakèt, estabilite
3.Apre yo fin trete 1U nan UNG a 50 ℃ pou 2 minit, modèl ki gen U anba 103 kopi yo ta dwe konplètman degrade epi pa gen okenn pwodwi anplifikasyon ka pwodwi.
4.Pa gen aktivite nuclease ekzojèn
Enstriksyon yo
| Eleman | Volim (μL) | Final konsantrasyon |
| 10 × PCR tanpon (dNTP gratis, Mg²+gratis) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ranplase dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mm |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Modèl | - | ＜1μg/reaksyon |
| ddH₂O | Pou 50 | - |
Remak: a: Si yo itilize pou qPCR/qRT-PCR, yo ta dwe ajoute pwofonde fliyoresan an nan sistèm reyaksyon an.Anjeneral, yon konsantrasyon primè final nan 0.2 μM ka bay bon rezilta;lè pèfòmans reyaksyon an se pòv, konsantrasyon Jadendanfan an ka ajiste nan seri a nan 0.2-1 μM.Anjeneral, konsantrasyon ankèt la optimize nan seri a nan 0.1-0.3 μM.Eksperyans gradyan konsantrasyon ka fèt pou jwenn pi bon konbinezon Jadendanfan ak pwofonde.
Nòt
1.Anzim UNG ka itilize pou retire pwodwi anplifikasyon dUTP ki kontamine nan sistèm reyaksyon an anvan reyaksyon anplifikasyon PCR la, lè sa a pou evite rezilta fo-pozitif akòz kontaminasyon pwodwi.
2.Tanperati pi bon pou anzim UNG yo dwe itilize nan reyaksyon PCR anti-kontaminasyon an jeneralman 50 ℃ pou 2 minit;kondisyon inaktivasyon an se 95 ℃ pou 5 minit.
3.Evite friz-degel souvan, epi pa ekspoze a gwo fluctuations tanperati.
4.Jèn diferan yo dwe anplifye gen efikasite itilizasyon diferan nan dUTP ak sansiblite nan anzim UNG, Se poutèt sa, si itilizasyon sistèm UNG mennen nan yon diminisyon nan sansiblite deteksyon, sistèm reyaksyon an ta dwe ajiste ak optimize, si ou bezwen sipò teknik, tanpri kontakte. konpayi nou an.
