Anzim UDG/UNG
UDG (uracil DNA glycosylase) ka katalize idroliz lyen N-glikozidik ant baz uracil la ak kolòn vètebral sik-fosfat nan ssDNA ak dsDNA.Li ka fasilman kontwole polisyon ayewosòl epi li apwopriye pou sistèm byoloji molekilè komen tankou PCR, qPCR, RT-qPCR ak LAMP.
Espesifikasyon
| Ekspresyon Lame | Recombinant E. coli ak uracil DNA glycosylase jèn |
| Pwa molekilè | 24. 8kDa |
| Pite | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inaktivasyon chalè | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Definisyon inite | Yon inite (U) defini kòm kantite anzim ki nesesè pou katalize idroliz l μg dU ki gen dsDNA nan 30 minit nan 25 ℃. |
Depo
Pwodwi a ta dwe estoke nan -25 ℃ ~ -15 ° C pou de zan.
Enstriksyon yo
1.Preparasyon melanj reyaksyon PCR la dapre sistèm sa a
| Eleman | Volim (μL) | Final konsantrasyon |
| 10 × PCR tanpon (Mg² + Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/Leach |
| Modèl ADN | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol / L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol / L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Jiska 50 | - |
Remak: Dapre kondisyon eksperimantal yo, konsantrasyon final la nan dUTP ka ajiste ant 0.2-0.6 mmol / L, ak 0.2 mmol / L dTTP ka ajoute oaza.
2.Pwosedi anplifikasyon
| Etap sik | Tanperati | Tan | Sik |
| dU ki gen degradasyon modèl | 25℃ | 10min | 1 |
| Aktivasyon UDG, modèl inisyal denaturasyon | 95℃ | 5 ~ 10 minit | 1 |
| Denaturasyon | 95℃ | 10 sec |
30-35 |
| Recuit | 60℃ | 20 sec | |
| Ekstansyon | 72℃ | 30seg/kb | |
| Ekstansyon final la | 72℃ | 5 min | 1 |
Remak: Tan reyaksyon a 25 ° C ka ajiste nan 5-10 minit selon kondisyon eksperimantal yo.
Nòt
1.UDG aktif nan pifò tanpon reyaksyon PCR.
2.Anzim yo ta dwe estoke nan yon bwat glas oswa sou yon beny glas lè yo itilize, epi yo ta dwe estoke nan -20 ° C imedyatman apre yo fin itilize.
3.Tanpri mete PPE ki nesesè yo, tankou rad laboratwa ak gan, pou asire sante w ak sekirite ou!
