Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Modifikasyon Antikò) se yon ADN polymerase thermostab ki kòmanse cho ki soti nan Thermus aquaticus YT-1, ki posede yon aktivite polymerase 5′→3′ ak yon aktivite endonukleaz flap 5′.Taq DNA polymerase ki kòmanse cho a se yon Taq DNA polymerase ki modifye pa antikò Taq thermolabile.Modifikasyon antikò ogmante espesifik, sansiblite, ak sede PCR.
Eleman
| Eleman | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Tanpon | 4 × 1 mL | 4 × 10 mL | 4 × 50 ml | 5 × 400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (antikò modifye) (5 U/μL) | 0.1 ml | 1 ml | 5 ml | 10 × 5 mL |
Aplikasyon
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 nan 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 ak 50% Glycerol.
Kondisyon Depo
Transpò anba 0 ° C epi yo dwe estoke nan -25 ° C ~ -15 ° C.
Definisyon inite
Yon inite defini kòm kantite anzim ki enkòpore 15 nmol dNTP nan materyèl asid ensolubl nan 30 minit nan 75 ° C.
Kontwol kalite
1.EndAktivite onukleaz:Enkubasyon 20 U nan anzim ak 4 μg pUC19 ADN pou 4 èdtan nan 37 ℃ te lakòz pa gen okenn degradasyon detekte nan ADN nan jan yo detèmine pa elektwoforèz jèl.
2.5 kb Lambda PCR:25 sik anplifikasyon PCR nan 5 ng Lambda ADN ak 1.25 inite Taq DNA Polymerase nan prezans 200 µM dNTPs ak 0.2 µM primè rezilta nan pwodwi a 5 kb espere.
3.Aktivite eksonukleaz:Enkubasyon yon reyaksyon 50 µl ki genyen yon minimòm de 12.5 U Taq DNA Polymerase ak 10 nmol 5´-FAM oligonukleotid pou 30 minit nan 37 ℃ pa bay okenn degradasyon detekte.
4.Aktivite RNase:Enkubasyon 10 µL reyaksyon ki gen 20 U anzim ak 1μg transkripsyon RNA pou 2 èdtan nan 37 °C pa te lakòz okenn degradasyon detekte RNA a jan yo detèmine pa elektwoforèz jèl.
5.Inaktivasyon chalè:Non.
Sistèm reyaksyon
| Eleman | Volim |
| Modèl ADNa | opsyonèl |
| 10 μM Forward Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 μL |
| dNTP Mix (10mM chak) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq Tanpon | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Dlo san nukleaz | Jiska 25 μL |
Nòt:
1) a.
| ADN | Kantite lajan |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid oswa viral | 1 paj-1 ng |
2) b.Konsantrasyon optimal Taq DNA Polymerase ka varye ant 5-50 inite/mL (0.1-0.5 inite/25 µL reyaksyon) nan aplikasyon espesyalize yo.
Pwotokòl tèmik monte bisiklèt
PCR
| Etap | Tanperati(°C) | Tan | Sik |
| Premye denaturasyona | 95 ℃ | 1-3 minit | - |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Sik |
| Recuitb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Ekstansyon | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Ekstansyon final la | 68 ℃ | 5min | - |
Nòt:
1) Yon premye denaturasyon 1 min nan 95 ° C ase pou pifò anplifikasyon.Pou modèl difisil, yon denaturasyon pi long nan 2-3mins nan 95 ° C rekòmande.Avèk PCR koloni, yo rekòmande yon premye denaturasyon 5 minit nan 95 ° C.
2) Etap la annealing se tipikman 15-60 s.Tanperati rkwit baze sou Tm nan pè Jadendanfan an epi li se tipikman 45-68 ℃.
